本作主人公“殺手先生”（櫻井孝宏 配音）是一名職業(yè)殺手，只要接到委托就什么都殺，甚至是自己的父母或者是小學生的暑假作業(yè)。他有個弟子，是父母雙亡的小學生，因為崇拜殺手先生而拜其為師。登場人物還有要向殺手先生報殺父之仇的17歲巨乳美少女、與殺手先生有多次近距離接觸的警長、一條名為“五郎”的警犬。本動畫每集篇幅為3分鐘，充滿了大量令人捧腹的冷笑話，可以說是以殺手先生為中心的冷笑話集錦。殺手先生雖然長相帥氣，為人冷酷，實際上是個冷面笑匠，與美少女、警長等角色的接觸中，產生各種超乎意料的搞笑橋段。
本動畫改編自TAMACHIKU創(chuàng)作的四格漫畫。
加隈亞衣 久野美咲 佐倉綾音 川澄綾子 茅野愛衣 高橋未奈美 赤崎千夏 大西沙織 瀨戶麻沙美 釘宮理惠 杜野真子 新井里美 石谷春貴 久保田民繪 小林裕介 巽悠衣子 種田梨沙
田中真弓 岡村明美 中井和哉 山口勝平 平田廣明 伊倉一惠 山口由里子 京田尚子 青野武 藤本隆弘 粕谷雄太 柴崎幸一 坂元奈月 鹿野優(yōu)以 日比愛子 中尾良平 金子英彥 森岳志 三宅淳一 藤川奈彌 藤川由記 加藤浩次 山本圭壹 稻垣吾郎
水田山葵 大原惠美 嘉數由美 木村昴 關智一 三石琴乃 藤本千秋 龍?zhí)镏睒?nbsp;松本幸 三瓶由布子 堀江由衣 愛河里花子 土師孝也 石井康嗣 川村萬梨阿 高戶靖廣 飯?zhí)锢?nbsp;寺崎貴司 浦川泰幸 宮本啟丞 小松靖 林和人 上山千穗 島本真衣 鈴木詩織 千葉繁 松平健 向井理